国产综合一区二区三区,99香蕉国产精品偷在线观看,性色少妇AV蜜臀人妻无码,成版人app网站

您好,歡迎進(jìn)入上海力敏實(shí)業(yè)有限公司網(wǎng)站!
一鍵分享網(wǎng)站到:
產(chǎn)品搜索
PRODUCT SEARCH
產(chǎn)品分類
PRODUCT CLASSIFICATION
您現(xiàn)在的位置:首頁 >> 技術(shù)文章 >> 細(xì)胞凋亡熒光Hoechst 33342 /PI 雙染
細(xì)胞凋亡熒光Hoechst 33342 /PI 雙染
瀏覽次數(shù):6494發(fā)布日期:2012-06-12

一、原理
1
。熒光染料 Hoechst 33342 能少許進(jìn)入正常細(xì)胞膜,使其染上低藍(lán)色,而凋亡細(xì)胞的膜通透性增強(qiáng),因此進(jìn)入凋亡細(xì)胞中的Hoechst 33342 比正常細(xì)胞的多,熒光強(qiáng)度要比正常細(xì)胞中要高,此外,凋亡細(xì)胞的染色體DNA 的結(jié)構(gòu)發(fā)生了改變從而使該染料能更有效地與DNA 結(jié)合,并且凋亡細(xì)胞膜上的p-糖蛋白泵功能受到損傷不能有效地將Hoechst 33342 排出到細(xì)胞外使之在細(xì)胞內(nèi)積累增加等都使凋亡細(xì)胞的藍(lán)色熒光增強(qiáng)。

2PI 染料是不能進(jìn)入細(xì)胞膜完整的正常細(xì)胞和凋亡細(xì)胞中,即活細(xì)胞對PI 染料拒染,而壞死細(xì)胞由于膜完整性在早期即已破損,可被PI 染料染色。

3根據(jù)這些特性,用Hoechst 33342 結(jié)合PI 染料對凋亡細(xì)胞進(jìn)行雙染色,就可在流式細(xì)胞儀上將正常細(xì)胞、凋亡細(xì)胞和壞死細(xì)胞區(qū)別開來。在雙變量流式細(xì)胞儀的散點(diǎn)圖上,這三群細(xì)胞表現(xiàn)分別為:正常細(xì)胞為低藍(lán)色/低紅色(Hoechst 33342+/PI+),凋亡細(xì)胞為高藍(lán)色/低紅色(Hoechst33342++/PI+),壞死細(xì)胞為低藍(lán)色/高紅色(Hoechst 33342+/PI++)。
二、試劑材料
Heochst 33342
染液1.0mL
Propidium Iodide
PI500 ul
10×PBS 10 mL
三、操作步驟
1.
懸浮生長的細(xì)胞離心收集,固定培養(yǎng)的細(xì)胞消化收集后,將105~106 個(gè)細(xì)胞懸浮于1ml 培養(yǎng)基中,再加入10ul Heochst 33342 染液,混勻,370C 孵育5-15 min;
2.
細(xì)胞于 40C 500 ~ 1000r/min 離心5min 棄去上清液;
3.
加入1.0ml PBS 懸浮細(xì)胞,加入5 ul PI 染液,避光混勻;
4
。流式細(xì)胞儀分析或熒光顯微鏡觀察:Heochst 33342 用氪激光激發(fā)的紫外光,激發(fā)波長為352nm,發(fā)射波長為400 ~ 500nm,產(chǎn)生藍(lán)色熒光;PI 用氬離子激光激發(fā)熒光,激發(fā)光波波長為488nm,發(fā)射光波波長大于630nm,產(chǎn)生紅色熒光。分析藍(lán)色熒光對紅色熒光的散點(diǎn)圖或地形圖。結(jié)果判斷:在藍(lán)色熒光對紅色熒光的散點(diǎn)圖上,結(jié)果為:正常細(xì)胞為低藍(lán)光/低紅光,凋亡細(xì)胞為高藍(lán)光/低紅光,壞死細(xì)胞為低藍(lán)光/高紅光。
四、注意事項(xiàng)
1.
在紅色熒光對藍(lán)色熒光散點(diǎn)圖上,還可見到細(xì)胞凋亡區(qū)向細(xì)胞壞死區(qū)遷移的軌跡,可能是凋亡細(xì)胞的DNA進(jìn)一步降解的緣故。
2.
Heochst 33342 染料與細(xì)胞孵育的時(shí)間不宜過長,一般控制在20min 之內(nèi)為宜。如果太長可引起Heochst33342 的發(fā)射光譜由藍(lán)光向紅光的遷移,導(dǎo)致紅色熒光與藍(lán)色熒光的比例改變,從而影響結(jié)果的判斷。
3.Propidium Iodide
PI)有毒,操作時(shí)要戴手套。

 

 

极品少妇高潮啪啪av无码吴梦梦 | 一起碰一起噜一起| 麻豆国产av国片精品有毛| 人妻巨大乳一二三区| www.色五月| 国产人妻人伦精品| 他底下好硬蹭着我想要| 好大好湿好硬顶到了好爽| 最美情侣韩国片免费观看| 人人爽天天碰天天躁夜夜躁| 无套内谢少妇毛片a片| FREEXXXX性中囯HD性| 成人免费电影网站| 女学生处破外女出血视频| 校草sao货撅起屁股扒男男| 少妇特黄a一区二区三区| 精品国产一区二区三区免费| 西西人体扒开大胆大尺度展露| 好久不见在线观看免费高清| 亚洲色婷婷久久精品av蜜桃| 国产美女久久精品香蕉69 | 两只奶头被老头吸肿了| 自拍 另类 综合 欧美| 中文字幕在线无码一区二区三区| 小少爷撅着屁股挨c双龙| 精品国产乱码久久久久久人妻| 五月丁香激情综合色啪啪| 日本SEX少妇老师丰满| 国精品无码人妻一区二区三区| 少妇富婆高级按摩出水高潮| 精品无码人妻一区二区三区品| 爆乳美女午夜福利视频| 草莓视频caomei888| 免费av视频在线观看| 公车上把腿张开让农民工摸| 久久久久亚洲av成人片乱码| 亚洲熟妇丰满XXXXX| 装睡被陌生人摸出水好爽| 岳今晚让我玩个够肥水一体探岳体 | 欧美性受xxxx88喷潮| 国产成人精品视频a片西瓜视频|